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Y染色体STR和SNP复合检测方法的研究 石美森

本帖最后由 ranhaer 于 2011-4-23 08:44 编辑

作者: 石美森
学科专业: 法医学
授予学位: 博士
学位授予单位: 四川大学 四川大学
导师姓名: 侯一平
学位年度: 2005
语 种: chi
分类号: D919.4
关键词: Y染色体  加尾引物  变性高效液相色谱  单碱基引物延伸反应  Y染色体遗传标记  非父排除能力  个人识别能力

【目的 为提高Y染色体遗传标记的个人识别能力和非父排除能力,建立Y-STR的复合扩增技术和新一代遗传标记Y-SNP的检测方法十分必要。本课题旨在构建九个Y-STR基因座的复合扩增检测体系,以期为法医Y-STR分型提供新的技术手段。建立多重Y-SNP单碱基引物延伸反应,掌握多重单碱基引物延伸反应的一般规律,为高通量分析Y-SNP提供基础。方法选定9个Y-STR基因座,应用加尾引物设计策略,构建9个基因座的Y-STR复合扩增荧光检测体系。依据DNA分析技术工作组(TWGDAM)指南进行法医学可行性研究和群体遗传学研究。选定3个Y-SNP,设计PCR引物和延伸引物,建立3个Y-SNP的多重单碱基引物延伸反应。利用在完全变性条件下HPLC对DNA片段的分析是按其长度和序列进行分离的原理,建立3个Y-SNP复合检测方法。并进行法医学可行性研究和群体遗传学研究。结果构建了9个Y-STR基因座:DYS434、GATA-A10、DYS438、DYS439、DYS531、DYS557、DYS448、DYS456,DYS444复合扩增检测体系(HY-9-plex)。法医学可行性研究结果显示,敏感度检验最低模板量HY-9-plex体系为0.5ng;分型结果稳定,重复性好,能够对常见基质上的斑痕正确分型,具有很好的组织同一性、种属特异性,可以耐受高女性成分的干扰,用于混合斑分析具有优势,可以用于实际检案。在120个男性样本中检出105个单倍型,单倍型变异度为0.9968,标准误为0002。 成功的建立了M9、M35、M98多重单碱基引物延伸反应。在WAVE核酸片段分析仪上,应用反相离子对变性高效液相色谱法实现了3个Y-SNP的复合检测。法医学可行性研究结果显示,检验最低模板量为0.5ng,分型结果稳定,重复性好,对法医学常见的生物检材包括毛发、血痕、精斑、烟蒂等均获得明确的实验结果。在105个男性样本中检出四种单倍型,单倍型变异度为0.5104,标准误为0.014。 结论本研究引入加尾引物设计策略,成功的构建了9个Y-STR基因座的HY-9-plex复合扩增体系。为Y染色体STR鉴别能力的提高提供了一种新的快速、高效及自动化的检测分析手段。实验过程中全部采用国产的Taq酶,扩增效率和特异性与进口的Taq酶比较无明显差异,为试剂国产化进行了有效的探索。 通过建立3个Y-SNP的多重SNuPE反应,揭示单碱基引物延伸反应的关键是选择合适的DNA聚合酶及引物和模板的比例。利用在完全变性条件下HPLC对DNA片段的分析是按其长度和序列进行分离的原理,实现了多重单碱基引物延伸反应产物的复合检测。为Y-SNP的法医学和多领域应用提供了方法学基础。

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自问,于民于家何用?
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